双光束紫外-可见分光光度计核查操作规程

双光束紫外-可见分光光度计核查操作规程工作原理

紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子能级的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。

双光束紫外-可见分光光度计朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度c及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。其常用表达式如下（式中ε为系数）：

A=ε·c·l

双光束紫外-可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。

1.2 适用范围

双光束紫外-可见分光光度计（以下简称仪器），系指从单色器发出的单色光经光束开关（斩光器）分成为样品和参比两条光束结构的仪器。它能消除光源不稳和放大器增益变化的影响，并能自动记录和扫描物质的吸收光谱图。仪器在开机后通常会做一些自检，但仍应按本规程进行检定。仪器的波长范围包括195~800nm，狭缝为0.1~5nm可调。

1.3 制定依据

本规程主要参照国家计量检定规程《JJG 178-2007紫外、可见、近红外分光光度计》、《JJF 1641-2017紫外可见分光光度计型式评价大纲》及《中国药典》2015年版四部指导通则“0401紫外-可见分光光度法”拟定。

2.项目及技术要求

2.1 波长准确度 ≤±1.0nm（紫外光区），≤±2.0nm（500nm附近）；

    波长重复性 ≤0.5nm。

2.2 基线平直度 ≤0.01 吸光度。

2.3 0%线噪声  ≤0.1%，100%线噪声  ≤0.5%.

2.4 吸光度准确度 应符合规定。

2.5 杂散光 <0.8%。

2.6 光谱带宽 ≤标示带宽±20%。

2.7 吸收池配对误差 ≤0.5%。

3 检测条件

3.1 环境条件

3.1.1 室温为10~30℃，相对湿度应小于65%。

3.1.2 工作台不受阳光直射，室内应无腐蚀性或其它影响测定的气体干扰。

3.1.3 周围应无影响检定的强电场、磁场和震动。

3.1.4 仪器检定前，须先开机预热半小时。马弗炉

3.2 设备

钬玻璃校正片。

3.3 标准物质和试剂

氧化钬（分析纯）、高氯酸（分析纯）、重铬酸钾（基准品）、硫酸（分析纯）、碘钠（分析纯）、亚硝酸钠（分析纯）。

4 检测方法

4.1 波长准确度和波长重复性的检测

4.1.1 用氧化钬溶液的241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64和640.52nm的吸收值进行检定。检定时先配制4%氧化钬的10%高氯酸溶液，将仪器波长设置为700~200nm范围，狭缝小于1nm，以空气为空白，调节透光率为100%。取上述氧化钬溶液，置1cm石英吸收池中，放入样品光路，以适当的扫描速度绘制氧化钬溶液的吸收图谱并打印出峰值，与规定值相比较。重复测定三次，取平均值，计算波长准确度与重复性。

4.1.2 用钬玻璃校正片代替氧化钬溶液，测定方法同上，其尖锐吸收峰主要有279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2和637.5nm，校正片使用前必须经过校正。

4.2 基线平直度的检测

4.2.1 按仪器要求进行基线校正后，调节狭缝2nm，扫描速度中速，取样间隔1nm，样品和参比光路均为空气。在仪器波长下限处加10nm，波长上限处减50nm范围内进行扫描，测量图谱中起始点的吸光度与图谱中偏离起始点多的吸光度（即大偏离点）之差即为基线平直度。

4.2.2 允许绘制的基线在更换光源或滤光片时微有跳动，必要时可在检定前再进行一次基线校正。

4.3 0%线噪声和100%线噪声的测定

4.3.1 仪器设置为时间扫描方式，波长设置为250nm，狭缝1nm，样品和参比光路均为空气，调整透光率为100%，用适当的扫描速度做时间扫描2分钟，观察100%线的变化，然后再将挡光块插入样品光路，观察0%线的变化2分钟，读出各自峰的大（谷）值的差，与规定值比较。

4.3.2 仪器设置时间扫描方式，波长置500nm，按上述方法测定500nm波长处的100%和0%线噪声。

4.3.3 如仪器无时间扫描方式，也可将仪器波长调至规定处，用目视观察2分钟，读出各自峰的大（谷）值的差。

4.4 吸光度准确度的检测  将仪器波长设置于400~200nm，狭缝1nm，先用配对的吸收池均装入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合适的扫描速度记录基线或自动校正基线，然后再将样品光路改变放0.006%重铬酸钾硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液，扫描并打印峰谷值，计算吸收系数，重复测定三次，取其平均值与规定的吸收系数许可范围进行比较，应符合表中的规定。

波长（nm）

235

（小）

257

（大）

313

（小）

350

（大）

吸收系数（百分吸收系数）的规定值

124.5

144.0

48.6

106.6

吸收系数（百分吸收系数）的许可范围

123.0~126.0

142.8~146.2

47.0~50.3

105.5~108.5

4.5 杂散光的检查

测定前应将挡光块插入样品池，校正仪器零点，其透光率应为0.0%。按下表列的试剂和浓度，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中规定。

试剂

浓度（%）

测定用波长（nm）

透光率（%）

碘钠

1.00

220

<0.8%

亚硝酸钠

5.00

340

<0.8%

4.6 光谱带宽的测定

4.6.1 将仪器置于单光束能量测定方式，波长范围置于660~650nm，选择小狭缝，用合适的扫描速度进行波长扫描，绘制氘灯谱线，并使氘灯峰值为满量程的三分之一，测量氘峰的半峰宽即为小光谱带宽，与规定值比较。

4.6.2 没有氘灯的仪器选择汞灯546.1nm（或253.7nm）的特征谱线同4.6.1方法扫描并计算。

4.7 吸收池配对误差的检测

4.7.1 取洗净的石英吸收池盛满水，在220nm处，以其中一只透光率为100%，再分别更换其它吸收池，测其透光率，凡误差在规定范围内的，再分别装入0.006%重铬酸钾的0.005mol/L硫酸溶液，在350nm处，以其中一只透光率为100%，分别测定其它吸收池，凡透光率误差在规定范围内的即为配对的吸收池。

4.7.2 取洗净的玻璃吸收池盛满水，在660nm处，以其中一只透光率为100%，再分别更换其它吸收池，测其透光率，凡误差在规定范围内的，再分别装入0.006%重铬酸钾的0.005mol/L硫酸溶液，在400nm处，以其中一只透光率为100%，分别测定其它吸收池，凡透光率误差在规定范围内的即为配对的吸收池。

4.7.3 由于吸收池在不同波长吸光度有少许改变，在使用时，先测定配对误差，必要时应扣除。

5 检测结果处理

自检结果全部符合技术要求者，即为合格，可以使用。若检测结果不符合规定，应重新调试仪器再进行自检，符合规定后方可使用。

6 检验周期

应至少每年检测一次，重要部件的维修和更换、变动放置地点、或对仪器性能有怀疑的，应按本规程随时进行自检。